| 下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及 Wnt信号通路的影响 |
| 投稿时间：2018-09-14 修订日期：2018-09-19 点此下载全文 |
| 引用本文：兰勇,邢人伟,陈明,王旭林.下调Tim-3对肝癌干细胞自我更新能力及 Wnt信号通路的影响[J].医学研究杂志,2019,48(6):83-88 |
| DOI：
10.11969/j.issn.1673-548X.2019.06.020 |
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| 基金项目:浙江省医药卫生科技计划项目(2018KY902) |
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| 中文摘要:目的 探讨Tim-3对肝癌干细胞(liver cancer stem cells, LCSCs) 自我更新能力及Wnt信号通路的影响。方法培养人肝癌细胞系HepG2、SMMC7721及正常干细胞系L02,流式细胞仪分选Nanog阳性(+)的肝癌干细胞；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Tim-3在3个细胞系中的mRNA表达水平及在肝癌干细胞中的mRNA表达水平；HepG2肝癌干细胞转染Tim-3 siRNA,荧光显微镜和光学显微镜检测转染率,Western blot法检测转染后Tim-3蛋白水平；qRT-PCR检测转染前后Tim-3、Wnt3、β-catenin的mRNA表达水平；细胞克隆形成试验和细胞成球试验检测转染前后HepG2肝癌干细胞的自我更新能力的变化。结果 qRT-PCR检测Tim-3在肝癌细胞系HepG2、SMMC7721中的 mRNA表达显著高于正常肝细胞L02(P＜0.05)；Tim-3在HepG2肝癌干细胞的表达明显高于肝癌细胞(P＜0.05)；在SMMC7721肝癌干细胞与肝癌细胞比较Tim-3 mRNA表达有低趋势；经荧光镜和光学显微镜观察,Tim-3 siRNA转染细胞良好；Western blot法结果表明,Tim-3蛋白水平在siRNA-451组细胞中的表达显著低于siRNA-750、siRNA-NC、未转染细胞(P＜0.05)；转染后HepG2干细胞Tim-3、Wnt3、β-catenin 的mRNA表达水平均显著下降；克隆形成实验和细胞球形成实验显示转染Tim-3 siRNA后,细胞的克隆形成能力和细胞球生长能力均显著降低(P＜0.05)。结论 下调Tim-3表达水平后,可通过抑制Wnt信号通路,最终减弱肝癌干细胞的自我更新能力。 |
| 中文关键词:Tim-3 肝癌干细胞 自我更新能力 Wnt信号通路 |
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