| 大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达 |
| 投稿时间：2018-12-18 修订日期：2019-01-28 点此下载全文 |
| 引用本文：钟波,李静,吕社民,侯伟,刘海燕,金巧艳,魏伟.大鼠Pdcd4基因真核载体的构建与表达[J].医学研究杂志,2019,48(10):58-62 |
| DOI：
10.11969/j.issn.1673-548X.2019.10.014 |
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| 基金项目:国家自然科学基金资助项目(81800017)；陕西省自然科学基础研究计划项目(2017JQ8045)；西安交通大学自由探索与创新项目(1191329843)；西安交通大学第二附属医院院基金资助项目 |
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| 中文摘要:目的 构建大鼠程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4, Pdcd4)基因真核表达载体,为进一步研究该基因的功能提供条件。方法 提取E3大鼠肺组织总RNA,RT-PCR扩增大鼠Pdcd4基因全长cDNA；经过双酶切、连接等反应,构建pEGFP-C1-Pdcd4重组表达载体。将该载体转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,通过RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞Pdcd4基因的表达。结果 RT-PCR扩增的大鼠Pdcd4全长cDNA为1410bp；pEGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体中插入片段与NCBI GenBank文库中大鼠Pdcd4 cDNA的序列完全一致；倒置荧光显微镜下观察转染后NR8383细胞中绿色荧光蛋白的表达确定转染成功；RT-qPCR与Western blot法检测NR8383细胞中Pdcd4基因的表达水平明显上调。结论 成功构建pEGFP-C1-Pdcd4重组真核表达载体,为进一步研究Pdcd4基因的作用机制奠定基础。 |
| 中文关键词:程序性细胞死亡因子4 基因重组 pEGFP-C1载体 支气管哮喘 |
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