靶向MSTN基因shRNA表达载体的构建与鉴定
投稿时间:2019-10-25  修订日期:2019-11-12  点此下载全文
引用本文:王丽俊,钮利喜.靶向MSTN基因shRNA表达载体的构建与鉴定[J].医学研究杂志,2020,49(5):165-169
DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2020.05.037
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王丽俊 山西大学生物技术研究所、教育部化学生物学与分子工程重点实验室太原 030006  
钮利喜 山西大学生物技术研究所、教育部化学生物学与分子工程重点实验室太原 030006 nlx@sxu.edu.cn 
中文摘要:目的 旨在构建靶向MSTN基因的短发夹RNA (shRNA) 真核表达载体,并鉴定其在小鼠体内的抑制效果。方法根据MSTN基因的mRNA序列(NM_010834.3)设计siRNA,并挑选出3条可能具有良好干扰效果的siRNA,设计合成shRNA,构建pSIREN-MSTN-shRNA表达载体。通过肌内注射法将载体递送至小鼠体内,利用实时荧光定量PCR和Western blot法检测干扰后小鼠肌肉组织中MSTN的mRNA表达量和蛋白质表达水平。结果 测序鉴定表明pSIREN-MSTN-shRNA表达载体构建成功,3个重组质粒均能够明显降低肌肉组织中MSTN的mRNA和蛋白质水平,其中pSIREN-M819表达载体干扰效果最好,与对照组比较,MSTN的mRNA表达量降低了71%,蛋白水平也明显降低。结论 成功构建了pSIREN-MSTN-shRNA表达载体,并在小鼠体内能够有效抑制MSTN基因的表达。
中文关键词:抑肌素 RNA干扰 实时荧光定量PCR 免疫印迹
 
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