苯丁酸钠通过下调CLDN4基因DNA甲基化对喉鳞状细胞癌增殖与凋亡的作用研究
投稿时间:2020-02-04  修订日期:2020-02-20  点此下载全文
引用本文:卡衣赛尔·卡哈尔,艾力根·阿不都热依木,谭元元.苯丁酸钠通过下调CLDN4基因DNA甲基化对喉鳞状细胞癌增殖与凋亡的作用研究[J].医学研究杂志,2020,49(7):62-68
DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2020.07.014
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作者单位E-mail
卡衣赛尔·卡哈尔 新疆维吾尔自治区人民医院耳鼻喉科乌鲁木齐 830001 kahaernewyear@163.com 
艾力根·阿不都热依木 新疆维吾尔自治区人民医院耳鼻喉科乌鲁木齐 830001  
谭元元 新疆维吾尔自治区人民医院耳鼻喉科乌鲁木齐 830001  
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81760023)
中文摘要:目的 观察苯丁酸钠对喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)细胞株 Hep-2增殖及凋亡的作用,探讨其作用机制与紧密连接蛋白4(claudin4,CLDN4)基因甲基化的相关性。方法 使用0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mmol/L的苯丁酸钠分别处理Hep-2细胞24h,利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术检测Hep-2细胞增殖、细胞周期与细胞凋亡,细胞免疫荧光法检测Hep-2细胞中caspase-3表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Hep-2细胞中DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3a)mRNA表达水平,免疫印迹试验(Western blot)法检测Hep-2细胞CLDN4蛋白表达水平,利用甲基化特异性 PCR 法(MSP)分析苯丁酸钠对Hep-2细胞CLDN4基因甲基化的影响。结果 苯丁酸钠呈剂量依赖地抑制Hep-2 细胞增殖,使细胞周期阻滞在 G0/G1期,并诱导细胞凋亡;4.0mmol/L苯丁酸钠处理Hep-2 细胞后,caspase-3 蛋白表达明显增加;苯丁酸钠处理Hep-2 细胞后,CLDN4蛋白表达水平随苯丁酸钠浓度增加而升高,而DNMT1、DNMT3a mRNA表达水平随苯丁酸钠浓度增加而下降;苯丁酸钠作用后CLDN4基因的高甲基化被逆转,并呈剂量依赖性。结论 苯丁酸钠可通过抑制甲基转移酶DNMT1、DNMT3a的表达使CLDN4基因去甲基化,从而抑制Hep-2细胞的增殖并诱导其凋亡。
中文关键词:喉鳞状细胞癌 Hep-2细胞 苯丁酸钠 CLDN4基因 DNA甲基化
 
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