| Reg3β干扰载体的构建及在H9C2心肌细胞中的鉴定 |
| 投稿时间：2020-01-31 修订日期：2020-03-04 点此下载全文 |
| 引用本文：易波,蔡玉立,李俊峰,包艳,陈小琳,文重远.Reg3β干扰载体的构建及在H9C2心肌细胞中的鉴定[J].医学研究杂志,2020,49(8):24-28 |
| DOI：
10.11969/j.issn.1673-548X.2020.08.007 |
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| 基金项目:国家自然科学基金资助项目(81900749)；中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(2042017kf0133)；湖北省自然科学基金资助项目(2018CFB150) |
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| 中文摘要:目的 构建再生基因蛋白3β(regenerating islet-derived protein 3 beta,Reg3β)干扰载体,并在H9C2大鼠心肌细胞中优化转染条件,鉴定抑制效果,为深入探索Reg3β在心血管疾病的作用提供有利的工具。方法 设计合成Reg3β干扰序列,在5′端加入一个SacⅠ的酶切位点,3′端加入LOOP环序列和反向互补序列,构建pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体。接着分别用Lipofectamine2000和Lipofectamine3000优化摸索转染大鼠H9C2心肌细胞的效率,以q-PCR和Western blot法检测H9C2细胞内Reg3β的表达量。结果 设计合成了3对Reg3β干扰序列,从中筛选出抑制效率最高达67.93%的序列,酶切和测序结果证实成功构建了pG1.2-Reg3β shRNA。经过优化比较发现,pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体Lipofectamine3000比例为1μg∶3μl时,其转染效率最高(50%以上)。q-PCR和Western blot法检测结果显示,最佳干扰载体在最高转染条件下可使H9C2细胞Reg3β表达量降低50%以上。结论 成功构建了pG1.2-Reg3β shRNA沉默载体,并在H9C2细胞中有效干扰Reg3β的表达,可用于探讨Reg3β在心血管疾病中的作用。 |
| 中文关键词:Reg3β基因 短发夹RNA 载体构建 H9C2心肌细胞 |
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