柯萨奇B组3型病毒SYBR Green Ⅰ RT-PCR 检测方法的建立
投稿时间:2021-07-07  修订日期:2021-07-09  点此下载全文
引用本文:张伟,李咏洁,杨凤梅,李艳艳,靳玮华,徐鸿界,李明学,刘权,赵远,和占龙.柯萨奇B组3型病毒SYBR Green Ⅰ RT-PCR 检测方法的建立[J].医学研究杂志,2022,51(1):55-59
DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2022.01.014
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作者单位
张伟 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
李咏洁 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
杨凤梅 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
李艳艳 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
靳玮华 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
徐鸿界 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
李明学 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
刘权 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
赵远 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
和占龙 中国医学科学院医学生物学研究所 昆明 650118 
基金项目:中国医学科学院医学与健康科技创新工程项目(2016-I2M-2-001);云南省重大科技专项(2017ZF020);昆明市科技创新和服务能力提升计划重点项目(2016-2R-07674)
中文摘要:目的 建立一种灵敏、特异的柯萨奇B组3型(CV-B3)病原SYBR Green Ⅰ RT-PCR实时荧光定量检测方法,用于快速、准确地检测CV-B3。方法 设计柯萨奇B组病毒通用引物以及VP1基因的T7启动子特异性引物,以体外转录获得的RNA为标准品,绘制标准曲线,建立CV-B3的荧光定量PCR检测方法;对检测方法的敏感度、特异性、重复性进行评价。结果该检测方法在10~109 拷贝/微升范围内具有良好的扩增效率和线性关系,最低检测限为10拷贝/微升,标准曲线r2=0.999, 扩增效率为95.7%;且对柯萨奇病毒A组6型(CV-A6)、柯萨奇病毒A组10型(CV-A10)、肠道病毒71型(EV-71)均无交叉反应,重复性实验变异系数(CV%)<2%。结论 本实验建立的检测方法敏感度较高,同时具备良好的特异性及重复性,可用于CV-B3病原的临床及实验室样本的定性定量检测。
中文关键词:柯萨奇病毒B组3型 SYBR Green Ⅰ RT-PCR
 
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