| 中文摘要:目的 研究宿主铁元素吸收相关转铁蛋白受体1(transferrin receptor,TfR1)对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)胞内生存的影响, 探讨其成为抗结核新靶点的可能。方法 采用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术对不同剂量铁过载小鼠以及M.tb感染小鼠肺组织切片和肺部组织研磨液上清TfR1表达丰度进行检测,提取肺组织总RNA并进行TfR1基因qPCR验证。siRNA技术构建TfR1-/-RAW 264.7巨噬细胞系,以FITC标记的耻垢分枝杆菌(FITC-Mycobacterium smegmatis,FITC-M.smegmatis)和M.smegmatis进行巨噬细胞吞噬和杀伤功能实验,并通过流式细胞术和细菌培养菌落计数方法进行检测分析。结果 低剂量、中剂量和高剂量铁剂小鼠肺组织TfR1表达水平与阴性对照小鼠差异无统计学意义。M.tb感染后,铁过载M.tb感染小鼠和单纯M.tb感染小鼠肺组织TfR1表达均显著上调,且前者TfR1的表达丰度显著高于后者。下调RAW 264.7巨噬细胞TfR1表达水平后,TfR1-/-与TfR1+/+RAW 264.7巨噬细胞在1、2和4h吞噬FITC-M.smegmatis数量组间差异无统计学意义。M.smegmatis感染后24、48和72h后,TfR1-/-RAW 264.7巨噬细胞杀伤功能则明显优于TfR1+/+RAW 264.7巨噬细胞,胞内残余活M.smegmatis数量显著低于未转染的TfR1+/+正常细胞。结论 TfR1参与了M.tb的侵染,并可能与M.tb获取铁元素以利其在胞内生存有关；TfR1的下调不影响M.tb的入侵,但抑制其在巨噬细胞内的增殖。 |
