| 中文摘要:目的 探究尿石素A对小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow derived macrophages, BMMs)向破骨细胞分化的影响。方法 提取小鼠骨髓腔BMMs,通过CCK-8法检测尿石素A对BMMs的增殖毒性,使用核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)诱导BMMs向破骨细胞分化并与浓度梯度尿石素A共培养,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)染色检测破骨细胞数量和面积大小,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测破骨分化相关基因水平表达,2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-Dichlorofluorescin diacetate, DCFH-DA)检测细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平。结果 CCK-8法检测结果显示,尿石素A在16μmol/L范围内对BMMs无明显毒性；TRAP染色结果表明,尿石素A显著抑制了BMMs向破骨细胞分化,成熟破骨细胞数目和面积减少(P<0.01)；RT-qPCR检测结果显示,尿石素A明显抑制了破骨分化相关基因(C-FOS、CTSK、MMP9、ACP5)的相对表达水平(P<0.01)；DCFH-DA检测结果显示,尿石素A明显降低了RANKL诱导的高ROS水平。结论 尿石素A能抑制RANKL诱导的BMMs向破骨细胞分化,并降低分化过程中的ROS,有望作为骨质疏松治疗的潜在药物。 |
