SCFβ-TrCP泛素化降解TFAP4抑制结直肠癌上皮间质转化的分子机制研究
投稿时间:2023-02-19  修订日期:2023-03-13  点此下载全文
引用本文:厉金雷,吴祥斌,蔡剑辉.SCFβ-TrCP泛素化降解TFAP4抑制结直肠癌上皮间质转化的分子机制研究[J].医学研究杂志,2024,53(4):159-165,106
DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2024.04.030
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作者单位
厉金雷 温州医科大学附属第一医院结直肠肛门外科 325000 
吴祥斌 温州医科大学附属第一医院结直肠肛门外科 325000 
蔡剑辉 温州医科大学附属第一医院结直肠肛门外科 325000 
基金项目:浙江省温州市科技局项目(Y20210932)
中文摘要:目的 探究SCFβ-TrCP泛素化降解转录因子激活增强子结合蛋白4(transcription factor-activated enhancer-binding protein 4, TFAP4)对结直肠癌上皮间质转化的影响。方法 体外培养人结肠腺癌细胞SW480,分别用不同浓度的MLN4924处理24h,然后采用Western blot法检测内源性TFAP4蛋白水平变化。在MLN4924处理的基础上,加入CHX分别干预不同时间,检测TFAP4的蛋白半衰期和泛素化水平差异。在CHX干预的SW480细胞中过表达带FLAG标签的TrCP-1,探究β-TrCP对TFAP4表达的影响,通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验检测过表达或敲低β-TrCP不是因为影响了其他信号通路而改变TFAP4的水平。将TFAP4上135位的E突变为A,139位的S突变为A,然后在CHX干预的SW480细胞中转染结构域突变的TFAP4,测定TFAP4半衰期和泛素化水平变化。CK1/CK2/GSK3磷酸化关键酶抑制剂对SW480细胞进行干预,Western blot法检测TFAP4水平,随后检测CK2抑制剂对TFAP4泛素化水平的影响,通过划痕实验分析细胞迁移能力,通过Transwell实验分析细胞侵袭能力。结果 TFAP4随着MLN4924处理浓度变化呈剂量依赖式增加,MLN4924处理能够显著延长内源TFAP4蛋白的半衰期,TFAP4和CK2存在相互作用,CK2抑制剂能降低TFAP4泛素化水平,蛋白的半衰期得到明显延长,敲低β-TrCP引起TFAP4的降解受到明显抑制,β-TrCP与TFAP4直接相互作用,并促进其被泛素化,TFAP4中E135A和S139A位点突变延长其半衰期,沉默β-TrCP能促进细胞增殖和迁移。结论 SCFβ-TrCP可能通过泛素化修饰降解TFAP4,从而抑制结直肠上皮间质转化的发生,进而抑制肿瘤的浸润、转移,可为结直肠癌治疗提供新的思路。
中文关键词:SCFβ-TrCP 泛素化 TFAP4 结直肠癌 上皮间质转化
 
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