| 中文摘要:目的 探讨纤维蛋白原Bβ15-42肽(fibrin-derived peptide Bβ15-42,FgBβ15-42)在细胞水平对缺血再灌注急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)线粒体自噬的影响。方法 体外培养人肾小管上皮细胞,随机分为5组,即正常对照组(Control组)、缺氧复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)模型组(H/R组)、H/R模型+ 9μmol/L FgBβ15-42肽组(Fg组)、H/R模型+20μmol/L氯喹组(CQ组)、H/R模型+ 9μmol/L FgBβ15-42肽+20μmol/L氯喹组(Fg+CQ组)。Control组:将同质化细胞置于完全培养基中,在有氧(5%CO2,21%O2)条件下培养28h。H/R组:细胞用无糖、无血清DMEM/F12培养基在缺氧(5%CO2,1%O2和94%N2)条件下培养24h,再更换含血清的DMEM/F12培养基置于有氧(5%CO2,21%O2)环境中4h。Fg组:在复氧时加入FgBβ15-42肽9μmol/L进行干预。CQ组:在进行同质化处理时加入氯喹进行预处理(20μmol/L),后序步骤同H/R组。Fg+CQ组:按照上述CQ组及FgBβ15-42组在不同时间段的加药顺序、剂量,及H/R组的造模时间进行干预。干预结束后采用CCK-8法检测HK2细胞活力；电子显微镜观察线粒体形态、线粒体自噬体结构及数量；Western blot法检测自噬相关蛋白p62、LC3的表达水平。结果 与Control组比较,H/R组细胞的存活率下降(P<0.01)；线粒体损伤明显,出现了肿胀、棘断裂等,且线粒体自噬体的数目增多；自噬标志性蛋白LC-3 Ⅱ/Ⅰ表达上调(P<0.05),自噬底物蛋白p62表达下调(P<0.01)。与H/R组比较,Fg组、CQ组、Fg+CQ组细胞的存活率回升(P<0.01),线粒体自噬体减少,LC-3 Ⅱ/Ⅰ表达下调(P<0.01),p62表达上调(P<0.05),细胞自噬被抑制。结论 FgBβ15-42肽干预后可降低H/R-AKI细胞中自噬及线粒体自噬水平,对HK2细胞H/R损伤有保护作用。 |
