| 中文摘要:目的 建立柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)特异的TaqMan一步法实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测方法。方法 根据CV-B5的VP1序列,设计特异性引物和TaqMan探针。将目的基因插入pMD18TM载体,在DH5α感受态细胞中扩增,大肠杆菌体外转录后获得RNA标准品并建立标准曲线,最后对检测方法的重复性、敏感度和特异性进行评价。结果 该方法在103~1011拷贝/微升的模板范围内具有良好的线性关系(r2>0.99),扩增效率E=100.9%,敏感度达1×103拷贝/微升,只对CV-B5有特异性扩增曲线,且重复性较好。结论本实验建立的TaqMan一步法RT-qPCR检测方法有较高的敏感度、特异性和重复性,有良好的抗干扰性,可用于CV-B5的临床样本检测和绝对定量分析。 |
