欢迎访问《医学研究杂志》网站！

ki-67核心启动子调控E1A表达的腺病毒的构建和鉴定

投稿时间：2023-12-22 修订日期：2023-12-29 点此下载全文

引用本文：张俊文,方胜,王佳琳,王佩文,张文欣,金贵善,刘福生.ki-67核心启动子调控E1A表达的腺病毒的构建和鉴定[J].医学研究杂志,2024,53(8):23-27

DOI： 10.11969/j.issn.1673-548X.2024.08.006

摘要点击次数: 467

全文下载次数: 531

作者	单位
张俊文	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
方胜	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
王佳琳	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
王佩文	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
张文欣	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
金贵善	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070
刘福生	北京市神经外科研究所脑肿瘤研究中心、首都医科大学附属北京天坛医院 100070

基金项目:国家自然科学基金资助项目(52373129)；北京市自然科学基金资助项目(7202020)

中文摘要:目的构建含有ki-67启动子的腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP,实现特异在ki-67阳性的脑胶质瘤细胞中复制。方法利用分子生物学的方法将ki-67启动子序列克隆到pGL3-basic载体中,双荧光素酶报告基因实验检测ki-67启动子活性；将ki-67启动子构建到穿梭质粒,并与辅助质粒共转染293T细胞,重组腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP；Ad-pki-67-E1A-GFP加入到脑胶质瘤细胞中,荧光显微镜观察GFP表达情况,同时实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测细胞中ki-67基因表达、腺病毒复制必需基因E1A表达和病毒拷贝数。结果克隆的ki-67序列在脑胶质瘤细胞中能够启动报告基因表达；酶切和测序证明ki-67启动子构建到穿梭质粒中,并重组得到腺病毒Ad-pki-67-E1A-GFP；Ad-pki-67-E1A-GFP能够感染脑胶质瘤细胞,并且E1A的表达和病毒拷贝数与细胞中ki-67表达呈正相关。结论 ki-67启动子改造后的腺病毒在脑胶质瘤细胞中复制,为进一步改造用于基因治疗恶性脑胶质瘤奠定了基础。

中文关键词:ki-67启动子腺病毒脑胶质瘤

查看全文查看/发表评论下载PDF阅读器