核定位CBFβ基因重组腺相关病毒载体的构建与鉴定
投稿时间:2022-04-28  修订日期:2022-05-16  点此下载全文
引用本文:关天富,段莉,王大平.核定位CBFβ基因重组腺相关病毒载体的构建与鉴定[J].医学研究杂志,2023,52(4):26-30
DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2023.04.008
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作者单位
关天富 汕头大学医学院 515031 
段莉 深圳市第二人民医院、深圳大学第一附属医院、广东省人工智能与数字骨科技术研究中心骨科 518035 
王大平 深圳市第二人民医院、深圳大学第一附属医院、广东省人工智能与数字骨科技术研究中心骨科 518035 
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81972116,81772394);深圳市科技计划项目(GJHZ20200731095606019,SGDX20201103095800003)
中文摘要:目的 构建携带核定位信号的核结合因子(nuclear location signal core binding factor beta, NLS-CBFβ)的重组腺相关病毒载体,从而实现体外诱导关节液间充质干细胞成软骨分化。方法 使用分子生物学方法将腺相关病毒载体与NLS-CBFβ基因相结合,构建pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒;采用PEI转染法将pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒和pAAV-RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中,包装并生产携带CBFβ的重组腺相关病毒rAAV-NLS-CBFβ-RFP,进一步将病毒感染人关节液来源间充质干细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测CBFβ基因在细胞内的表达水平。结果 双酶切及DNA测序证明NLS-CBFβ已成功构建到pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒中,AAV-293细胞表达红色荧光蛋白提示共转染成功,包装的重组腺相关病毒rAAV-CBFβ-RFP感染人关节液间充质干细胞后,能显著增加细胞中CBFβ基因的表达水平。结论 携带NLS-CBFβ重组腺相关病毒的包装成功,并能在人关节液间充质干细胞中有效转染和表达,为进一步探索rAAV-NLS-CBFβ诱导间充质干细胞成软骨分化的研究提供了实验基础。
中文关键词:核定位信号 核结合因子 腺相关病毒 软骨分化 间充质干细胞
 
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